通過PCR擴(kuò)增E．coli DH5a的γ-ggt基因，產(chǎn)物經(jīng)純化后用Kpn I和Xho I雙酶切，回收γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶基因目的片斷，并與經(jīng)相同雙酶切的表達(dá)載體pET-32a連接，得到重組質(zhì)粒pET-GGT。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E．coli BL21中，獲得工程菌。工程菌株經(jīng)0．05mol／L IPTG，32℃誘導(dǎo)表達(dá)，濕菌體的酶活達(dá)到2．0U／g，大約是出發(fā)菌株E．coli DH5a的15倍。工程菌催化L-谷氨酰胺和鹽酸乙胺反應(yīng)生成茶氨酸的產(chǎn)量達(dá)到29．40g/L，L-Gln的轉(zhuǎn)化率為48．22％，其催化L-谷氨酰胺和鹽酸乙胺反應(yīng)生成茶氨酸的能力比出發(fā)菌株E．coli DH5a提高了100多倍。
完成機(jī)構(gòu)：農(nóng)業(yè)部茶葉化學(xué)工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所,浙江杭州310008
