茶樹(shù)是一種集硒能力較強的植物，它能將無(wú)機態(tài)硒轉化為有機態(tài)硒而易于人體的吸收。因此，茶葉是理想的補硒飲品，而對茶葉中硒含量的測定是補硒研究最基本的任務(wù)。硒易于揮發(fā)而損失，常規的濕法消解由于溫度不易控制及加熱時(shí)間較長(cháng)而易造成硒損失與樣品和環(huán)境污染。自從1975年文獻中報道微波濕法消解樣品以來(lái)，微波溶樣技術(shù)得到了較大的發(fā)展。微波消化樣品的方法具有快速、準確、省試劑、省費用、污染少、待測元素不易損失等特點(diǎn)。筆者采用微波消解分子熒光法測定茶葉中的硒含量，主要探討微波法消解茶葉樣品時(shí)，微波消解試劑、消解功率、時(shí)間等因素對硒測定的影響，以?xún)?yōu)化微波法消解條件。鑒于消解樣品茶葉的特殊性，結合茶葉微波消解條件，對基于硒（IV）與DAN（2，3-二氨基萘）生成具有強熒光特性的4，5-苯并苤硒腦的分子熒光光度法測定硒含量相關(guān)的DAN用量、萃取劑用量等測定條件進(jìn)行了優(yōu)化。
1材料與方法
1.1材料茶葉樣品為陜西省紫陽(yáng)縣紫健牌紫陽(yáng)綠茶（陜西省紫陽(yáng)縣紫健富硒茶廠(chǎng)生產(chǎn)）。硒粉（光譜純，天津科密歐科技有限公司生產(chǎn)）；2，3一二氨基萘（AJohsonMattheyCompa-ny，NewJersey.USA）。EDTA、鹽酸羥胺、濃硝酸、高氯酸、濃鹽酸、環(huán)己烷、甲酚紅指示劑及其他試劑至少為分析純，未經(jīng)純化直接使用，試驗用水均為二次蒸餾水。主要儀器有LWMC一205可調功率微波化學(xué)反應器（南京陵江科技開(kāi)發(fā)有限公司），RF一5301型熒光光度計（日本島津）。
1.2方法
1.2.1儲備液的配制。100.0ug／ml硒標準儲備液，0.1％2，3二氨基萘（DAN）溶液，EDTA一鹽酸羥胺混合液：參照GB／T5009.93-2003中華人民共和國國家標準--食品中硒的測定方法》中“8.1、8.2、8.5”配制。1.0g／ml硒標準使用液：移取一定量硒標準儲備液用0.1mol／LHC1稀釋?zhuān)诒鋬缺４妗?/p>
1.2.2標準曲線(xiàn)的繪制。
分別準確移取1.0g／ml硒標準液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml于250ml錐形瓶中，各加20.0mlEDTA一鹽酸羥胺混合溶液，加入5.0mlDAN溶液，用鹽酸一氨水緩沖溶液調節pH值1.5～2.0，溶液呈淡紅橙色，在沸水浴中加熱反應5min，取出立即冷卻，然后分別用6.0ml環(huán)己烷萃取，振搖5min，將全部溶液移入分液漏斗，靜置分層后棄去水層，環(huán)己烷萃取層從漏斗上口轉入帶蓋的比色管中待用。萃取液用1cm比色皿，在RF一5301型熒光光度計上進(jìn)行熒光強度的測定。熒光光度計選擇高靈敏度，狹縫寬度3BITI，激發(fā)波長(cháng)377nm，發(fā)射波長(cháng)519nlFl，由測得的熒光值與se濃度繪制標準工作曲線(xiàn)。
1.2.3樣品消解及分析。
取80.0g茶葉樣品于坩堝中，在60℃下烘2h，將烘好的樣品粉碎后用100目分樣篩分樣。準確稱(chēng)取0.5g處理好的樣品于微波化學(xué)反應器的容器中，先用5.0ml5.0％硫酸潤濕，再加入濃硝酸一高氯酸（4：1）混合酸10.0rnJ，放入微波反應器中消解，微波功率0.20kW時(shí)消解30min，當伴有白煙，且溶液淡黃色、無(wú)殘渣時(shí)取出，然后沸水浴加熱15min，除去殘余的氮氧化物，取下冷卻，加入10.0ml鹽酸（1：9）混勻，繼續加熱至溶液變?yōu)榍辶翢o(wú)色并伴有白煙出現，此時(shí)se6+還原為se4+。將此消解液同標準曲線(xiàn)繪制方法和條件測定其熒光強度，由標準曲線(xiàn)上查得硒濃度值，計算其相應含量。
2結果與分析
2.1微波消解試劑的選擇硒的測定中，樣品消解試劑一般選擇硝酸一高氯酸混酸體系，由于微波消解不同于濕法消解，有必要對混酸比例進(jìn)行選擇。取0.5g篩分好的茶葉樣品5份于消解容器中，分別用5.0ml5.0％硫酸潤濕，向每份樣品中加入HNO：HCIO體積比為2：1、3：1、4：1、5：1、6：1的混合酸共10.0Inl，在微波功率為0.10kW時(shí)消解樣品，以溶液無(wú)殘渣、淡黃色作為消化終點(diǎn)，然后按“1.2.3”步驟操作，用“1.2.2”方法測定試液的熒光強度，測定結果如表1所示。由表1可見(jiàn)，混酸比例HNO：HCIO在5：1-6：l時(shí)測定結果偏低，說(shuō)明消解不完全；而在2：1-4：1時(shí)，測定結果無(wú)顯著(zhù)性差異。本著(zhù)HCIO少用的原則，選用混酸比例HNO：HCIO為4：1。
表1消解試劑對測定結果的影響
2.2微波消解功率、時(shí)間的確定取0.5g篩分好的茶葉樣品5份，分別用5.0ml5.O％硫酸潤濕，向每份樣品中加入4：1的HNO：HCIO混酸10.0ml，將每個(gè)樣品分別在微波功率0.1O、O.15、0.20、0.25、0.30kW時(shí)消解，以溶液無(wú)殘渣、淡黃色作為消化終點(diǎn)，觀(guān)察記錄達到終點(diǎn)所需的時(shí)間，然后同“2.1”的方法，測定各試液的熒光強度（表2）。試驗發(fā)現，隨著(zhù)功率增大，消解時(shí)間減短，但當功率達0.25kW時(shí)，試液熒光強度明顯減小?？赡苁且驗槲⒉üβ蔬^(guò)高時(shí)，因溫度較高造成樣品中硒的揮發(fā)損失。綜合考慮功率、時(shí)間因素，該試驗選擇0.20kW消解30min。
表2微波條件對測定結果的影響
2.3絡(luò )合劑DAN溶液用量的優(yōu)化鑒于消解樣品茶葉的特殊性，基于國標測定方法，筆者對DAN溶液（0.1％）的加入量進(jìn)行了優(yōu)化。方法是：于7個(gè)250rrd錐形瓶中各加入1.0~g／ml硒標準使用液1.0rnl，再加入20.0mlEDTA一鹽酸羥胺混合液，用鹽酸和氨水緩沖溶液調節pH值1.5～2.0，分別加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml0.1％DAN溶液，沸水浴中加熱5min，用10.0rnl環(huán)己烷萃取后，測定各萃取液的熒光強度，試驗結果見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，當DAN加入量達到4.0ml時(shí)，熒光強度趨于穩定，確定5.0rnl為DAN最佳用量。
圖1DAN對熒光強度的影響
2.4環(huán)己烷萃取劑用量的優(yōu)化試驗中發(fā)現，環(huán)己烷用量不足，萃取不完全，熒光值較??；環(huán)己烷用量過(guò)大，被萃取物濃度降低，亦導致熒光值下降。因此，筆者對萃取劑甩量進(jìn)行了優(yōu)化試驗。取1.0ml硒標準使用液1.0ml于6個(gè)250ml錐形瓶中，加入20.0mlEDTA一鹽酸羥胺混合溶液，緩沖溶液調節pH值1.5～2.0，加入0.1％DAN溶液5.0ml，沸水浴中加熱5min，分別用2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0ml環(huán)己烷萃取反應物，測定各溶液的熒光強度。由圖2所示的試驗結果，確定環(huán)己烷的最佳用量為6.0rnl。
圖2環(huán)己烷用量對熒光強度的影響
2.5共存離子的影響研究表明，銅、鐵、鉬等重金屬離子及大量氧化物對測定硒有干擾，可用EDTA.鹽酸羥胺消除。由于茶葉中的有關(guān)干擾離子含量和種類(lèi)具有差異性，為此，
針對紫陽(yáng)富硒茶，選擇Cu2+、Hg2+、zn2+、Fe3+、Bi3+、Cd2+等離子，按“1.2.2”的試驗方法進(jìn)行干擾試驗。結果表明，測定1.0ug硒，加入20.0ml0.2％EDTA一鹽酸羥胺混合溶液，zn2+、Fe3+、Bi3+、Cd2+在300倍時(shí)不干擾測定，Cu2+、Hg2+對硒的測定有一定干擾，Cu2+的允許量為200倍，Hg2+的允許量為150倍。
2.6標準曲線(xiàn)和相對標準偏差按“1.2.2”標準曲線(xiàn)的繪制方法，以1.0Ixg／ml硒標準溶液繪制標準曲線(xiàn)。由圖3可見(jiàn)，硒含量在1.0-7.0ug時(shí)線(xiàn)性良好，回歸方程y=91.761x，相關(guān)系數R=0.9909。對1.0ug／ml硒標樣進(jìn)行了6次平行試驗，其標準偏差2.755，RSD值為2.5％。
2.7樣品中硒含量的測定及加標回收率試驗用“1.2.3”的試驗方法微波消解茶葉樣品，測定紫陽(yáng)富硒茶樣品中的硒含量，同時(shí)做加標回收率試驗，并以濕法消解（GB／T5009.93-2003）作對照試驗，測定結果見(jiàn)表3。兩種消解方法測定樣品結果的相對誤差為4.21％。
表3樣品分析結果3結論
（1）采用微波化學(xué)反應器消解茶葉樣品的消解條件：0.5g樣品加5.0InI5.0％硫酸潤濕，加入HNO：HCIO（4：1）10.0ml，在0.20kW時(shí)消解30min。經(jīng)與濕法消解對照。樣品測定結果可靠，回收率高。該方法用于茶葉中硒的消化，省時(shí)、省力、污染小。
（2）應用分子熒光光度法測定紫陽(yáng)富硒茶中微量硒含量，并對相關(guān)影響因素進(jìn)行了優(yōu)化。確定最佳測定條件為：pH值1.5～2.0，EDTA一鹽酸羥胺混合液用量20.0rnl，0.1％DAN加入量5.0rI1l，沸水浴加熱5min，6.0ml環(huán)己烷萃取，于激發(fā)波長(cháng)377nm、發(fā)射波長(cháng)519Nm測定熒光強度，效果較好。此外，該測定方法還可用于食品及其他產(chǎn)品中硒含量的測定。
