微波輔助水提取云南鳳尾茶總黃酮工藝的研究鳳尾茶（Elsholtzia bodinieri Vaniot），又名東紫蘇、野山茶、涼茶、牙刷草、小香薷等，為唇形科香薷屬一年生草本植物，生于山坡、路旁草叢中或灌木林下。主要分布在云南、甘肅、四川、青海等西部地區，是一種常用的民間中草藥。其味甘苦微辛、性平，具有發(fā)散解表，理氣和胃之功效，主治外感風(fēng)寒、頭身痛、咽喉痛、消化不良和肝炎等癥。據本草考證，香薷屬植物最早記載為藥食兼用，后在應用中各有側重而出現藥食功能分離。鳳尾茶是目前該屬植物唯一保留食用功能的品種。滇南各少數民族由于喜食腥燥食物，常以鳳尾茶作為日常茶飲。據報道，鳳尾茶的化學(xué)成分主要含有黃酮類(lèi)化合物、揮發(fā)油、萜類(lèi)和甾體等。已有研究對鳳尾茶總黃酮的提取均采用了有機溶劑乙醇，如胡浩斌等采用微波輔助流動(dòng)萃取法對甘肅東紫蘇中的黃酮類(lèi)成分進(jìn)行了提取和測定，確定了最佳提取工藝條件，證明根中的含量最高為133.7mg／g，莖次之為78.51mg／g，葉中較低為25.47mg。陳海云等用A1C13分光光度法對云南風(fēng)尾茶中總黃酮的含量進(jìn)行了分析，結果表明風(fēng)尾茶中黃酮主要集中在葉部，根部含量最少，全株含量為10.49％。而熱水浸提鳳尾茶的研究未見(jiàn)報道。水提取法具有簡(jiǎn)單易行、安全性高、投入資金少的特點(diǎn)，且日常生活中鳳尾茶也是以水沖泡進(jìn)行飲用的，所以以水為溶劑提取鳳尾茶中的總黃酮具有一定的研究意義。與天然產(chǎn)物的傳統提取方法比較，微波輔助提取技術(shù)具有方便、省時(shí)、能耗少等優(yōu)點(diǎn)，本實(shí)驗采用微波輔助的方法，以水為溶劑對云南風(fēng)尾茶中的總黃酮進(jìn)行提取，測定了總黃酮的提取率，確定了最佳提取工藝條件。并與熱水浸提比較，證明微波提取法確實(shí)是一種高效快捷且浸提率高的方法。
1材料與方法
l。l材料與儀器
鳳尾茶采自云南省建水縣。蘆丁對照品，購于中國藥品生物制品檢定所；其他試劑均為分析純。G8023ETL.V8微波爐，順德格蘭仕電器有限公司；FA1004電子天平，上海天平儀器廠(chǎng)；722光柵分光光度計，上海分析儀器廠(chǎng)。
1.2方法與步驟
l_2.1標準曲線(xiàn)的制定：
鳳尾茶中總黃酮含量的測定采用AICI3比色法。準確稱(chēng)取在120~C干燥至恒重的蘆丁對照品5.0mg，加無(wú)水乙醇溶解，定容至100mL容量瓶中，搖勻。準確地吸取此溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置于10mL容量瓶中，精密加0.Imol／L的三氯化鋁溶液3mL，HAc-NaAc緩沖溶液（pH5.8）定容至刻度。放置30min，用第一瓶溶液作空白，在波長(cháng)420nm處測定吸光度，以質(zhì)量濃度（mg／mL）為橫坐標，吸光度為縱坐標，得回歸方程y：0.1076+1.828X.r=0.9978。
1.2.2樣品的提取及總黃酮含量的測定：
鳳尾茶全草，粉碎，過(guò)20目篩備用。精密稱(chēng)取一定量樣品，按一定的料液比，加入90~C熱水并保溫30min后，放入微波爐中，選擇適當的功率和時(shí)間提取，取出定容、過(guò)濾。精確吸取lmL，稀釋5倍，加入試劑和方法同“1.2.1標準溶液的制定”。根據所測吸光度和標準曲線(xiàn)得出微波輔助水提法總黃酮的含量?？傸S酮提取率=（總黃酮質(zhì)量濃度×定容體積）x5／樣品質(zhì)量×100％
1.2.3提取工藝的單因素考察
1.2.3.1不同料液比對提取率的影響
分別以20、30、40、50、60倍的90℃熱水對鳳尾茶保溫30min后，300W微波加熱5min，發(fā)現總黃酮的提取率在料液比為1：40時(shí)最高。
1.2.3.2不同微波提取時(shí)問(wèn)對提取率的影響
以40倍熱水對樣品保溫浸提30min后，300W微波加熱2min、5min、10mill、15min后，結果為總黃酮的提取率在加熱5min時(shí)達到一個(gè)峰值。
1.2.3_3微波功率對提取率的影響
以40倍熱水對樣品保溫浸提30min后，選擇200W、300W、400W、500W、600W五個(gè)功率檔分別對樣品進(jìn)行加熱提取，結果表明總黃酮提取率在400W時(shí)增加最快，600W時(shí)提取率最低。
1.2.4正交試驗優(yōu)化
在單因素試驗的基礎上選取微波功率、提取時(shí)間、料液比作為影響提取效果的主要因素，進(jìn)行3因素、3水平正交試驗（表1）。并對結果進(jìn)行極差和方差分析。
1.2.5方法的重復性、穩定性、回收率實(shí)驗
精密稱(chēng)取樣品5份，根據正交試驗得出的最佳實(shí)驗條件，對鳳尾茶樣品中黃酮類(lèi)成分的含量進(jìn)行測定。精密吸取樣品總黃酮提取液0.5mL共5份，分別加入不同體積的10ug/ml的蘆丁標準溶液進(jìn)行回收率實(shí)驗。在60min內每隔15min分別測定樣品和標準對照品溶液的吸光度以確定方法的穩定性。
1.2.6熱水浸提與微波水提取的比較90℃熱水浸提30min，測定黃酮含量；采用最佳提取工藝條件，但不經(jīng)90℃熱水浸提30min，比較兩種方法的提取率。
2結果與分析
2.1正交試驗結果
表1因素水平
表2正交試驗設計及結果
由正交試驗的極差分析可知，各因素影響順序為A>C>B，即時(shí)間>溶劑用量>功率，最佳工藝條件為A2B2C1，即提取時(shí)間5min，微波功率400w，溶劑用量為30倍?？瞻琢屑凑`差列的R值小于各因素的值，因此試驗結果具有有效性。方差分析結果顯示，A、B、C三因素的影響沒(méi)有顯著(zhù)性差異（>0.05），從P值的大小中反映出A因素的影響最大，這與極差分析的結果相符合。
表3正交試驗結果的方差分析
2.2重復性、穩定性、回收率實(shí)驗結果
精密稱(chēng)取樣品5份，根據以上所選最佳實(shí)驗條件，對鳳尾茶樣品中黃酮類(lèi)成分的含量進(jìn)行測定。由表4結果可知，樣品總黃酮含量平均為52.35mg／g，RSD為1.12％。說(shuō)明該方法的重復性較好。表2正交試驗中第6組總黃酮提取率為54.38mg／g，高于精密度實(shí)驗的結果，可能由于實(shí)驗方法和操作上存在一定誤差精密吸取樣品總黃酮提取液0.5mL共5份，分別u），NN體積的10ug/ml的蘆丁標準溶液進(jìn)行回收率實(shí)驗。由表5結果可知，樣品加標后回收率在95.74％～102.42％之間，平均回收率達99.69%。
表4重復性實(shí)驗結果
表5回收率實(shí)驗結果
在60min內每隔15arin分別測定樣品和標準對照品溶液的吸光度，吸光度值均未發(fā)生改變。放置2、4、8h，吸光度也基本不變，說(shuō)明各樣品提取液及蘆丁標準品顯色反應較穩定。2-3熱水浸提與微波水提取的比較結果單純用90℃熱水浸提30min，總黃酮提取率為4.489％，明顯低于熱水浸提后再在最佳提取條件下用微波輔助提取的5.235％，若不經(jīng)90℃熱水浸提30min，其余條件不變，總黃酮的提取為4.861％。進(jìn)一步說(shuō)明了微波提取法可提高待測組分的提取率，而在本實(shí)驗中，微波提取前先用熱水浸提也是必要的。
3結論
云南鳳尾茶是一種富含黃酮類(lèi)化合物的藥食兩用的植物，通過(guò)本實(shí)驗確定了微波輔助水提取其中總黃酮的最佳工藝為：原料經(jīng)90℃熱水浸提30min，料液比1：30，微波功率400W，微波提取時(shí)間5rnin，提取率為5.235％。說(shuō)明微波提取法作為一種高效、節能、省時(shí)的技術(shù)用于云南風(fēng)尾茶總黃酮的測定是可行的。該實(shí)驗對云南風(fēng)尾茶的開(kāi)發(fā)研究和綜合利用奠定了理論基礎。
