丹參滴注液是中藥丹參單味藥制劑，為淡黃色澄明液體，具有活血化瘀、通脈養(yǎng)心、活血消腫、養(yǎng)血安神等功效，臨床上用于治療冠心病、心絞痛、胸中憋悶等疾病。其活性成分可分為脂溶性和水溶性兩大類，其中的水溶性有效成分主要為丹參素與原兒茶醛。丹參素和原兒茶醛的分子結(jié)構(gòu)如圖1所示。目前，這兩者的測定方法主要有分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法、毛細管電泳法、電化學法和毛細管電色譜法J。而微流控芯片法分離測定丹參滴注液中的丹參素與原兒茶醛尚未見報道。本文采用微流控芯片非接觸電導(dǎo)檢測方法測定丹參滴注液中丹參素與原兒茶醛的含量，與現(xiàn)有方法相比，該方法具有樣品前處理簡單、分離快速、操作簡便，試劑用量少等優(yōu)點，為丹參滴注液中有效成分的分離測定提供了一種比較方便準確的新方法。
圖1丹參素和原兒茶醛的分子結(jié)構(gòu)
1實驗部分
1.1儀器與試劑
微型壓電陶瓷高壓電源mj、非接觸電導(dǎo)檢測器和芯片l1¨均為自行研制，結(jié)構(gòu)和原理如文獻[10-11]報道。真空泵；數(shù)據(jù)工作站（本課題組編制）；PCL一711B型A／D卡（臺灣EVOC出品）；數(shù)據(jù)記錄與處理在普通P4微機上完成。2.（N一嗎啉代）乙磺酸（MES）購自香港Amres公司；三（羥甲基）氨基甲烷（Tris），F(xiàn)ai?caChemicalSupplies，優(yōu)級純；其它試劑為國產(chǎn)分析純。所有溶液用二次蒸餾水配制，在使用前用0.22m微濾膜過濾。對照品購自中國藥品生物制品檢定所，丹參素批號10855-200405，原兒茶醛批號110810-200506；丹參滴注液，上海華源長富藥業(yè)有限公司，批號07030202。
1.2對照品與供試品溶液的制備
稱取原兒茶醛對照品0.0200g，用二次蒸餾水溶解并定容于10mL量瓶中，得2.00g／L原兒茶醛對照品溶液，4℃下保存，臨用時稀釋成各濃度的標準溶液。用同樣方法配制2.00g／L丹參素對照品溶液。丹參滴注液，用水稀釋至適當?shù)臐舛确秶鳛榇郎y液。
1.3實驗方法
新芯片使用前依次用乙醇、0.1mol／LHNO、0.1mol／LNaOH、H，O清洗10、10、60、30min。每次實驗前分別用0.1mol／LNaOH、H，O及緩沖溶液清洗l0、10、15min。進樣電壓在100～500V范圍選擇，分離電壓在500～5000V范圍選擇。每次實驗完畢后用緩沖溶液沖洗5arin，以確保較好的重復(fù)性。每天實驗完畢用二次蒸餾水將通道充滿。檢測器的激發(fā)電壓60V（一）、激發(fā)頻率60kHz。檢測器的輸出信號經(jīng)A／D卡轉(zhuǎn)換。實驗在恒溫（25℃）、恒濕（60％）條件下進行。
2結(jié)果與討論
2.1條件優(yōu)化選擇
2.1.1緩沖溶液的選擇實驗考察了H3PO4一NaH2PO4、Na2HPO4一NaH2PO4、Na2HPO4一Na3PO4、檸檬酸一檸檬酸鈉、Tris-HCI、HAc-NaAc、硼砂、乙二胺一HBO、三乙胺一HBO、二乙胺一HP0、三乙胺一HPO、MES-His、Tris-H，BO等幾種緩沖體系在不同濃度、不同配比條件下對原兒茶醛、丹參素分離檢測的影響。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在除Tris-HBO外的上述緩沖體系中，基線穩(wěn)定但不出現(xiàn)樣品峰；而在Tris-HBO緩沖體系中，電泳電流小、峰形較好、基線平穩(wěn)、噪音低、分離時間較短，是較理想的緩沖體系，有利于實驗條件的優(yōu)化。在此基礎(chǔ)上，實驗分別考察了Tris（10～30mmol／L）和HBO（10～30mmol／L）不同濃度配比的緩沖體系對分離檢測的影響。發(fā)現(xiàn)隨著緩沖液濃度的增加，體系分離度變大，丹參素、原兒茶醛的峰高增加，但遷移時間延長。且隨著離子濃度加大，電流增大，焦耳熱效應(yīng)使基線噪音隨之增加，影響分離效果；當緩沖液的濃度過低時緩沖能力降低，響應(yīng)差，不利于定量檢測。綜合考慮分離和檢測效果，選擇20mmol／LTris一20mmol／LHBO，（pH=7.0）緩沖體系為分離介質(zhì)。
2.1.2添加劑影響實驗考察了甲醇、乙醇、環(huán)糊精（β一CD）、乙腈、十二烷基磺酸鈉（SDS）等幾種添加劑不同添加量對分離和檢測的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)分別加入體積分數(shù)為5％～10％的乙醇、甲醇或乙腈時，峰形變好，樣品分離良好，基線噪音降低，但是重復(fù)性差。而在加入0.5～5mmol／L-CD時，峰形無明顯改善，拖尾現(xiàn)象嚴重。加入SDS，峰形改善，樣品分離較好，重復(fù)性也好。在0.5～1.5mmol／ISDS范圍，隨著SDS量的增加，峰形變好，但在2mmol／L以后，隨著SDS量的增加，峰形變差，基線噪音開始加大。綜合分離檢測效果，選擇優(yōu)化的緩沖液濃度20mmol／LTris一20mmol／L硼酸一1.5mmol／LSDS（pH=7.0）作為電泳介質(zhì)。
2.1.3分離電壓實驗考察了分離電壓（0.5～3.0kV）對分離和檢測的影響。發(fā)現(xiàn)電壓低于1.5kV時，樣品分離時間延長，分離效果不好，峰形差。隨著分離電壓的升高，樣品分離時間縮短，分離效果改善，但分離電壓高于2.6kV時，樣品分離效果變差?？赡苁谴藭r電流太大引起的焦耳熱所致。綜合考慮分離和檢測效果，選擇分離電壓為2.5kV。上述優(yōu)化條件下的電泳圖譜如圖2。
圖2丹參素與原兒茶醛的芯片毛細管電泳圖
2.2線性關(guān)系與檢出限
精密量取丹參素和原兒茶醛對照品的儲備液，配制成1～1.0×10mg／L的系列標準溶液，在優(yōu)化條件下測定。在10～500mg／L范圍內(nèi)，丹參素的峰高（Y）與質(zhì)量濃度（X，mg／L）呈良好的線性關(guān)系，線陛方程為Y=一13.2+0.762X，相關(guān)系數(shù)r=0.986，檢出限為5.0mg／L（S／N=3）。在50～500mg／L范圍內(nèi)，原兒茶醛的峰高（1，）與質(zhì)量濃度（X，mg／L）呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=10.9+0.215X，相關(guān)系數(shù)r=0.993，檢出限為10mg／L（S／N=3）。
2.3精密度實驗
在優(yōu)化的實驗條件下，精密量取丹參滴注液，重復(fù)進樣6次，測得丹參素峰面積的RSD值為2.1％、原兒茶醛峰面積的RSD值為2.8％，表明該方法的重復(fù)性比較好。
2.4樣品分析與回收率
在優(yōu)化的實驗條件下，取丹參滴注液稀釋10倍后進樣3次測定。根據(jù)線性方程計算出丹參素的質(zhì)量濃度為1.4×10mg／L，原兒茶醛的質(zhì)量濃度為2.7×10mg／L。用標準加入法將丹參素、原兒茶醛的對照品按低（50mg／L）、中（100mg／L）、高（150mg／L）3種不同水平分別加入，測定其加樣回收率，丹參素和原兒茶醛的平均回收率分別為99％和98％，平均RSD為2.5％（n=6）和3.1％（n=6）。
3結(jié)論
原兒茶醛和丹參素均含羧基，在中性至堿性的pH范圍內(nèi)帶負電荷，可對電導(dǎo)檢測器響應(yīng)。本實驗應(yīng)用微流控芯片非接觸電導(dǎo)檢測裝置在優(yōu)化實驗條件下3min內(nèi)實現(xiàn)了對丹參滴注液中主要有效成分原兒茶醛和丹參素的分離和檢測。非接觸電導(dǎo)檢測器操作比較簡便，檢測電極不與溶液接觸，也不存在電極中毒的問題。此法操作簡便、易行、靈敏度高，結(jié)果準確可靠，可用于丹參滴注液中有效成分的分離測定。
