采用MTT法、Comet assay(彗星實(shí)驗)和RT—PCR法研究了表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)對DNA損傷劑卡莫司汀作用后張氏肝細胞的DNA損傷及相關(guān)修復基因表達的影響。結果表明:EGCG能阻止卡莫司汀所致張氏肝細胞的生長(cháng)抑制,卡莫司汀單用對張氏肝細胞的IC50為43.31μg/mL,當用25μg/mL和50μg/mL的EGCG與卡莫司汀聯(lián)用時(shí),對張氏肝細胞的IC50分別提高至52.46μg/mL和46.65μg/mL。彗星分析結果表明,EGCG還能減小卡莫司汀引起的張氏肝細胞DNA損傷,彗星Olive尾矩值由單用時(shí)的9.07±5.48降為聯(lián)用時(shí)的6.02±2.46。EGCG還能使卡莫司汀所致張氏肝細胞的DNA修復基因mgmt和alkb的表達下降得到回升,卡莫司?。?0μg/mL)處理張氏肝細胞24h后,mgmt和alkb的mRNA水平(與外參0634-actin的比值)比未處理組明顯下降(分別由0.451±0.041和0.356±0.120下降至0.323±0.046和0.046±0.017,p〈0.05或p〈0.01),當EGCG與卡莫司汀聯(lián)合處理24h后,二者的mRNA水平基本恢復到正常(p〉0.05),與外參β-actin的比值分別為0.451±0.041和0.451±0.041。說(shuō)明EGCG能保護卡莫司汀對正常肝細胞的DNA損傷,因為它能逆轉卡莫司汀所致正常肝細胞內DNA修復酶基因mgmt和alkb的表達下降。
完成機構:[1]電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院分子生物學(xué)實(shí)驗室,610051 [2]成都恩威集團四川恩威中醫藥研究開(kāi)發(fā)有限公司藥理室